QuickPrimer
酶定点突变引物设计
Results
引物结果
| 引物名称 | 引物序列 5'→3' |
|---|---|
| 输入序列和突变信息后开始设计。 | |
Rule
算法说明
- 引物结构
- 正向引物 = 上游 12 bp 重叠区 + 突变密码子 + 下游非重叠区；反向引物 = 上游非重叠区 + 同一 12 bp 重叠区的反向互补。
- Tm 计算
- 线上版已移植 Biopython Tm_NN 默认 DNA_NN3 算法；Na+ = 50 mM，DNA 浓度 = 0.4 μM。
- 筛选顺序
- 优先满足目标非重叠区域 Tm ±2°C，再考虑 3' 端 G/C。
- 侧翼序列
- CDS 两侧可额外输入约 30 bp 序列，用于靠近 N 端或 C 端的突变位点；位点编号仍按酶 CDS 计算。
- 突变密码子
- 默认采用大肠杆菌偏好密码子；同一位点的多种突变只输出一条反向引物。